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        PCR/qPCR耗材選擇——材料及顏色篇

         更新時(shí)間:2023-02-13    點(diǎn)擊量:1541

        目前市場上大多數(shù)PCR/qPCR管材選用的是聚丙烯材料。聚丙烯是一種惰性的有機(jī)材料,對反應(yīng)物質(zhì)的吸收值最小,并且聚丙烯可以承受PCR過程中的溫度變化,在經(jīng)過溫度變化后不易變形,因此可以確保獲得最佳的PCR結(jié)果。

        在生產(chǎn)過程中,為了保證生物兼容性、純度以及批次間的一致性,應(yīng)當(dāng)使用全新的醫(yī)學(xué)級的分子生物學(xué)級別的高品質(zhì)的聚丙烯作為原料進(jìn)行生產(chǎn)。有些PCR / qPCR板為了配合高通量機(jī)器人的操作,需要具有更高強(qiáng)度的邊框來配合機(jī)器人的抓取,通常情況下邊框的材料使用的是更高強(qiáng)度的聚碳酸酯。

        在某些PCR過程中,如數(shù)字PCR,對于耗材的選擇更為嚴(yán)苛。由于數(shù)字PCR使用的是有限稀釋檢測法,因此在操作配樣的過程中如果樣品吸附在槍頭或管壁上,將會(huì)造成樣本的缺失,從而造成結(jié)果的偏差。對于樣本稀缺且珍貴的實(shí)驗(yàn)中,低吸附度的耗材可以減少材料的損耗,并且可以保證PCR實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。因此低吸附度的耗材贏得了研究學(xué)者的青睞。

        PCR/板有多種顏色,如透明色、白色、黃色、藍(lán)色、紅色……普通的PCR過程中,管/板的顏色并不會(huì)影響PCR的結(jié)果,但是在qPCR中,管/板的顏色對于結(jié)果是有很大的影響的。

        應(yīng)用于qPCR的耗材,一般是白色或者磨砂的塑料耗材。qPCRDNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量,因此與透明塑料管/板相比,白色或磨砂的管/板在應(yīng)對熒光時(shí)表現(xiàn)更為靈敏,并且結(jié)果更加準(zhǔn)確。這是因?yàn)榘咨暮牟目梢宰柚篃晒庹凵涑龉埽_(dá)到熒光折射的最小化,將更多的熒光信號(hào)反射回檢測器,從而增加信噪比,表現(xiàn)為更高的靈敏度;另外,白色管壁也可阻止熒光信號(hào)被PCR儀的加熱模塊吸收或進(jìn)一步反射,從而可以降低重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的誤差,提高準(zhǔn)確性。除此之外,在進(jìn)行qPCR時(shí)需使用超透明的管蓋或光學(xué)密封膜來密封PCR/板,保證熒光不受干擾;還需要參考qPCR的耗材要求,選擇最合適的耗材,達(dá)到想要的實(shí)驗(yàn)效果。


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