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本說(shuō)明書(shū)以DNA轉(zhuǎn)染為例進(jìn)行說(shuō)明：
第0天：細(xì)胞接種
→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中接種細(xì)胞
培養(yǎng)皿 | 細(xì)胞數(shù)量 | V=轉(zhuǎn)染過(guò)程中培養(yǎng)基的體積 |
96孔 | 7500 - 25000 | 0.125 mL |
24孔 | 40000 - 100000 | 0.5 mL |
12孔 | 80000 - 200000 | 1 mL |
6孔/35mm | 150000 - 400000 | 2 mL |
60mm/25cm2燒瓶 | 200000 - 850000 | 5 mL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1 x 106 - 4 x 106 | 10 mL |
*備注：對(duì)于特定的細(xì)胞類(lèi)型或懸浮細(xì)胞，請(qǐng)參考完整的方案。
第1天：使用jetOPTIMUS®試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染
→僅使用jetOPTMUS®緩沖液
→以60-80%融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞
培養(yǎng)皿 | W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®體積 |
96孔 | 12.5 µL | 0.13 µg | 0.13-0.19 µL |
24孔 | 50 µL | 0.5 µg | 0.5-0.75 µL |
12孔 | 100 µl | 1 µg | 1-1.5 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 2 µg | 2-3 µL |
60mm/25cm2燒瓶 | 500 µl | 4 µg | 4-6 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 10 µg | 10-15 µL |
第2-3天：測(cè)量基因表達(dá)
protocol優(yōu)化：
（1）測(cè)試不同的DNA量：X、0.5 X和1.5 X。
（2）測(cè)試不同的DNA/jetOPTIMUS®比例，1:1至1:1.5。
（3）有關(guān)細(xì)胞特異性協(xié)議，請(qǐng)聯(lián)系益元利康客服獲取。
培養(yǎng)皿 | W=jetOPTIMUS®緩沖液的體積 | X=添加的DNA量 | Y=jetOPTIMUS®體積 |
96孔 | 12.5 µL | 0.10-0.20 µg | 0.10-0.30 µL |
24孔 | 50 µL | 0.25-0.75 µg | 0.25-1 µL |
12孔 | 100 µl | 0.5-1.5 µg | 0.5-2.25 µL |
6孔/35mm | 200 µl | 1-3 µg | 1-4.5 µL |
60mm/25cm2燒瓶 | 500 µl | 2-6 µg | 2-9 µL |
100mm/75cm2燒瓶 | 1000 µl | 5-15 µg | 5-22 µL |
提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的提示：
（1）轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。
（2）將DNA量減少到0.5倍，同時(shí)保持之前使用的DNA/jetOPTIMUS®比例。
（3）在較早的時(shí)間點(diǎn)（例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí)）分析轉(zhuǎn)染。
（4）在敏感細(xì)胞的還原血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
（5）檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。
（6）確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前已傳代兩次以上且少于20次。
（7）丟棄過(guò)度培養(yǎng)的細(xì)胞。
良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)踐：
（1）適當(dāng)儲(chǔ)存jetOPTIMUS®（5±3°C）。
（2）定期檢查支原體污染情況。
（3）使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
（4）血清質(zhì)量可能?chē)?yán)重影響轉(zhuǎn)染效率。購(gòu)買(mǎi)新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。
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polyplus轉(zhuǎn)染試劑jetOPTIMUS®產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)提供商——天津益元利康生物科技有限公司成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子
生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專(zhuān)注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷(xiāo)售，經(jīng)營(yíng)的品牌主要有：ThermoFisher、
Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、polyplus等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，
努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。
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