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        熒光原位雜交的原理

         更新時(shí)間:2025-04-23    點(diǎn)擊量:152
          熒光原位雜交技術(shù)(FISH)是一種利用熒光信號(hào)檢測(cè)探針的原位雜交技術(shù)。它將熒光信號(hào)的高靈敏度、安全性及直觀性和原位雜交的高特異性結(jié)合起來(lái),通過(guò)熒光標(biāo)記的核酸探針與待測(cè)樣本核酸進(jìn)行原位雜交。那么你知道熒光原位雜交的原理是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
         
          FISH的原理:
         
          FISH分為直接法和間接法。
         
          直接法是在已知堿基序列的核酸探針上標(biāo)記熒光素,在組織切片、間期細(xì)胞及染色體標(biāo)本上與靶核酸進(jìn)行原位雜交。因所形成的雜交體帶有熒光素。故可在熒光顯微鏡下直接觀察。
         
          間接法使用非熒光物質(zhì)標(biāo)記的核酸探針。如生物素標(biāo)記探針,再通過(guò)親和連接或免疫反應(yīng)帶入熒光物質(zhì)來(lái)檢測(cè)雜交體的存在。
         
          廣義上講,F(xiàn)ISH靶序列可以是DNA或RNA,既可以用來(lái)進(jìn)行基因組層面的研究,也可以進(jìn)行表達(dá)層面的研究。
         
          目前常用的熒光素有異硫氰酸熒光素、得克薩斯紅、羅丹明及其衍生物四甲基異硫氰酸羅丹明等。
         
          FISH的應(yīng)用:
         
          1. 染色體分析:FISH技術(shù)可以用于染色體分析,例如通過(guò)檢測(cè)染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常,了解基因組拷貝數(shù)的變化。這可以幫助診斷染色體疾病,如唐氏綜合癥、 Edwards綜合征等。
         
          2. 基因定位:FISH技術(shù)可以幫助研究人員確定基因在染色體上的位置,這對(duì)于研究基因功能、基因組進(jìn)化和疾病相關(guān)基因具有重要意義。
         
          3. 病毒檢測(cè):FISH技術(shù)可以檢測(cè)病毒基因組,例如艾滋病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)等。這可以幫助研究人員了解病毒在細(xì)胞內(nèi)的位置和復(fù)制情況,為抗病毒治療提供指導(dǎo)。
         
          4. 腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估:FISH技術(shù)可以用于檢測(cè)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的基因異常,如基因擴(kuò)增、缺失和重排。這些信息有助于腫瘤的診斷和預(yù)后評(píng)估,以及指導(dǎo)個(gè)體化治療。
         
          5. 微生物學(xué)研究:FISH技術(shù)可以檢測(cè)和定位微生物(如細(xì)菌和真菌)的核酸序列,從而了解微生物的種群結(jié)構(gòu)、基因表達(dá)和病原性。
         
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