羧基純化磁珠產(chǎn)品介紹：

羧基活化的 SepFast MAG 用于制備磁層析介質(zhì)。 它與含有伯胺基團(tuán)的配體形成化學(xué)穩(wěn)定的酰胺鍵。 它有一個(gè)長(zhǎng)間隔區(qū)（9 個(gè)原子）。 目標(biāo)分子結(jié)合后，磁性樹(shù)脂可以很容易地在磁鐵的幫助下從生物原料中分離出來(lái)。 羧基活化瓊脂糖可用于固定含胺分子。 耦合化學(xué)是基于碳二亞胺的，是一種成功且有據(jù)可查的技術(shù)。

羧基純化磁珠產(chǎn)品特性：

羧基活化的 SepFast MAG 4HF 由高度交聯(lián)的 4% 瓊脂糖磁性材料制成。 它使更苛刻的操作條件成為可能，因此可以應(yīng)用低 pH 值和某些高濃度有機(jī)溶劑。 由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性，長(zhǎng)期以來(lái)一直用于色譜分離。 這些顆粒具有開(kāi)孔結(jié)構(gòu)，對(duì)大蛋白質(zhì)分子具有出色的傳質(zhì)特性。 通過(guò)將長(zhǎng)的親水性間隔臂連接到骨架上來(lái)激活基礎(chǔ)基質(zhì)。 它在碳二亞胺試劑存在下直接與伯胺基反應(yīng)。 羧基活化的 SepFast MAG 以 20% 乙醇中的水懸浮液形式提供。

羧基純化磁珠使用流程：

1.配體固定化

以下是配體一般的偶聯(lián)流程。

（1）將目標(biāo)配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中，將pH值調(diào)整為4.5。偶聯(lián)緩沖液的體積可以是固定凝膠體積的一半或相同。

（2）在過(guò)濾裝置中用至少5倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗羧基活化凝膠。

（3）將洗凈并吸干的凝膠（來(lái)自步驟2）轉(zhuǎn)移到步驟1制備的溶液中。

（4）將碳二亞胺作為干粉或預(yù)先溶解的溶液添加到漿液中至終濃度為0.1 M。如果碳二亞胺預(yù)先溶解在水中，則將pH值調(diào)整為4.5。

（5）在室溫或4-8℃下混合漿料。

（6）在第1個(gè)小時(shí)內(nèi)通過(guò)添加 0.1 M NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值至4.5。

（7）將偶聯(lián)反應(yīng)放置2-24小時(shí)。

（8）用5倍體積的0.1 M醋酸鹽緩沖液+0.5M NaCl，pH4.0洗滌凝膠，然后用5倍體積的0.1 M Tris/HCl+0.5 M NaCl，pH 8.0洗滌凝膠。重復(fù)上述洗滌2次以上。

（9）使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

2. 固定化效率的一般考慮

（1）pH

偶聯(lián)反應(yīng)在pH4.5-7.5之間非常有效地進(jìn)行。但是可以優(yōu)化偶聯(lián)pH以獲得最佳結(jié)果（例如，高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性）。在偶聯(lián)反應(yīng)的第1個(gè)小時(shí)內(nèi)，pH值會(huì)降低。要記得通過(guò)添加0.1 M NaOH來(lái)調(diào)節(jié)偶聯(lián)pH值。之后pH值會(huì)趨于穩(wěn)定。

（2）偶聯(lián)方案

去離子水可直接用作偶聯(lián)溶液。應(yīng)避免使用含有氨基、巰基或羧基的緩沖溶液，因?yàn)樗鼈儠?huì)與配體偶聯(lián)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)?？梢砸胂♂尩哪承┯袡C(jī)溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測(cè)試此類(lèi)溶劑的適用性。

（3）碳二亞胺的選擇

應(yīng)使用水溶性碳二亞胺，例如1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)或1?環(huán)己基?3?(2?嗎啉代乙基)碳二亞胺(CMC)（通常合成為metho?p?甲苯磺酸鹽）。EDC是常用的碳二亞胺試劑。

（4）碳二亞胺的濃度

添加的碳二亞胺的量應(yīng)以化學(xué)計(jì)量的方式超過(guò)活化的羧基。建議以最終反應(yīng)漿料中的0.1 M作為起點(diǎn)。

（5）反應(yīng)時(shí)間和溫度

可以優(yōu)化偶聯(lián)過(guò)程中配體和活化填料之間的接觸時(shí)間以保持配體的生物活性。典型的反應(yīng)時(shí)間是在室溫或冷藏室中過(guò)夜。

（6）屏蔽剩余的活化配體

如果加入過(guò)量的配體，則可能不需要封閉殘留的活化基團(tuán)。未與配體反應(yīng)的活化基團(tuán)應(yīng)在碳二亞胺存在下通過(guò)添加額外的含有pH 8 - 9伯胺的小分子（例如1 M乙醇胺）來(lái)封端。

（7）最終填料的洗滌

偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。

3.固定化親和填料的使用

配體偶聯(lián)填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。

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